分光光度法測量的理論依據(jù)是伯郎—比耳定律(Lambert-Beer law):當(dāng)容液中的物質(zhì)在光的照射和激發(fā)下,產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng)。但物質(zhì)對光的吸收是有選擇性的,各種不同的物質(zhì)都有其各自的吸收光譜。所以根據(jù)定律當(dāng)一束單色光通過一定濃度范圍的稀有色溶液時,溶液對光的吸光度值A(chǔ)與溶液的濃度C(g/l)或液層厚度L(cm)成正比。其定律表達式A=KCL(K是比例系數(shù))。當(dāng)C的單位為mol/l時,比例系數(shù)用E表示,則A=ECL稱為摩爾吸光系數(shù)。其單位為L·mol-1·cm-1。它是有色物質(zhì)在一定波長下的特征常數(shù)。
?、俟庠?。光源的壽命有限,為了延長光源使用壽命,在不使用儀器時不要開光源燈,應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)。在短時問的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開啟。儀器連續(xù)使用時間不應(yīng)超過3h。若需長時間使用,建議間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應(yīng)及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附。若不小心接觸過,要用無水乙醇擦拭。
②單色器。單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開。選擇波長應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動,不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉,必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色,應(yīng)立即更換。
?、畚粘?。必須正確使用吸收池,應(yīng)特別注意保護吸收池的兩個光學(xué)面。
?、軝z測器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光,且應(yīng)避免強光照射或受潮積塵。
?、莓?dāng)儀器停止工作時,必須切斷電源。
?、逓榱吮苊鈨x器積灰和沾污,在停止工作時,應(yīng)蓋上防塵罩。
?、邇x器若暫時不用要定期通電,每次不少于20~30min,以保持整機呈干燥狀態(tài),并且維持電子元器件的性能。
超微量分光光度計應(yīng)用液體的表面張力特性,樣品體積只需要0.5~2ul,在檢測臺上,經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細管等耗材檢測吸收值的優(yōu)點。